Berikut ini saya sampaikan berbagai persiapan untuk membuat medium isolat fungi endofit :
1. Persiapan medium
- - PDAè media untuk isolasi fungi endofit.
- - media untuk pemeliharaan C. albicans.
- - medium untuk uji penghambatan terhadap mikroorganisme uji
- -PDBè untuk uji antibiotik dan menentukan kurva pertumbuhan.
2. Persiapan jaringan tumbuhan è isolat f.e diambil dari spesies tumbuhan yang sehat di sekitar kebun Biologi
3. Sterilisasi permukaanèPotongan-potongan daun dan ranting kemudian dipindahkan ke petridish lalu dituangi alkohol 70 % 10 menitè dibilas dengan aquades steril beberapa kaliè Clorox 50 % selama 1 menitèDibilas lagi dengan aquades steril è alkohol 70 % selama 1 menit èdibilas aquades steril lagi.
3. Isolasi fungi endofitèBahan daun, ranting dari berbagai tanaman diletakkan diatas media isolasi dengan pinset sterilè Selanjutnya diinkubasikan pada temperatur kamar selama 2-7 hari.
4. Peremajaan isolat èPeremajaan biakan fungi endofit dan C. albicans dilakukan dengan cara goresan pada medium PDA miring èdiinkubasikan pada temperatur kamar selama 24-48 jam (2-4 hari).
5. Seleksi fungi endofit è Isolat fungi endofit diinokulasikan diatas permukaan media PDA yang berisi biakan C. albicans èdiinkubasikan selama 2-7 hariè zona jernih pada sekitar tumbuhnya fungi endofit.
6. Pengukuran pertumbuhan isolat fungi endofit èIsolat fungi endofit yang mampu menghambat pertumbuhan C. albicans diukur berat keringnya dengan menggunakan medium Potato Dextrosa Broth (PDB). Pelet diukur berat basah dan berat kering
7. Uji produksi senyawa antibiotikaèPengujian biologi senyawa antibiotik dilakukan dengan menggunakan metode Paper Disc Agar Diffusion Technique
9. Identifikasi fungiè Identifikasi fungi dilakukan secara morfologi baik makroskopis maupun mikroskopis dengan beberapa literatur anatara lain Alexopoulos (1979), Bessey (1952) dan Ando ( 2001).
10. Uji statistikè ANAVA è Duncan Multiple Range Test (DMRT) untuk menentukan umur mana yang berbeda nyata
Daftar Pustaka : Klik Disini
0 comments:
Post a Comment